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蛋白雙向 電泳實驗服務
蛋白雙向 電泳實驗服務
更新時間:2023-10-27
訪問量: 3884
廠商性質: 生產廠家

蛋白雙向 電泳實驗服務
提供商:上海研謹生物/杭州研謹生物
服務名稱:蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務
規(guī)格:實驗服務
價格:500元
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。
更多實驗技術服務請瀏覽網(wǎng)站其他內容,或來電詳詢!

蛋白雙向 電泳實驗服務產品概述:


一、蛋白雙向 電泳實驗服務實驗技術簡介

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術,可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

二、蛋白雙向 電泳實驗服務概述

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經(jīng)雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發(fā)生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術,可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

三、服務內容

1、蛋白質抽提與定量;

2、雙向電泳;

3、轉膜,封閉,孵育,顯示成像。

四、實驗操作流程

1、第--項電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

2、第二項電泳結束后,取出凝膠進行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

4、一抗孵育,根據(jù)抗體說明書選擇孵育時間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一抗孵育后取出膜

TBST洗滌3次,每次5分鐘。

5、二抗孵育:根據(jù)一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混臺均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜臺考慮蛋白質的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

7、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

送樣須知,為了保證2D Western blot技術服務能順利進行,樣品寄送需滿足以下要求:

1、顧客提供:組織、細胞、蛋白質溶液等; 一抗(可交由研謹公司代購)。

2、運輸要求:干冰或液氮包裝寄送。

注:樣本應避免各類污染和反復凍融。

五、技術服務報告內容

1、蛋白質定量結果及電泳上樣量;

2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果;

3、2D Western blot完整的實驗報告,包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。

附: 2D Western blot實驗步驟

1、2D Western blot蛋白質樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質,破壞蛋白質與蛋白質間的相互作用,避免各類干擾物質,樣品制備與IEF兼容等。

2、雙向電泳的主要步驟,第-項電(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

3、第二項電泳結束后,取出凝膠進行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

5、-抗孵育,根據(jù)抗體說明書選擇孵育時間,常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、二抗孵育:根據(jù)-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜合考慮蛋白質的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

8、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗外包及論文潤色服務,協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實驗代做服務:

 

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