国产真实露脸乱子伦,99精品国产成人一区二区,亚洲日日做日日谢日日鲁,永久免费的网站在线观看

當前位置:
首頁 > 技術文章 > Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書
目錄導航 Directory
服務熱線
技術支持Article
Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書
點擊次數(shù):1177 更新時間:2020-08-05

                                                                                                                    

Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書

 

Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit

目錄號:K0199   

保存:蛋白酶抑制劑混合物:-20℃

   其它組分:2                   - 8  度    

 

組分說明

 

Catalog no.               K0199B

Kit Size                 50 次

Nc-試劑   A               50 ml

Nc-試劑    B              3 ml

 

Nc-試劑   C              25 ml

蛋白酶抑制劑混合物            750 μl

 

產(chǎn)品簡介

  Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒能夠簡單、快速的提取來源于哺乳動物細胞及組織的細胞核和細胞漿蛋白,所提取蛋白保持生物學活性。本試劑盒首先通過細胞漿蛋白抽提試劑裂解細胞膜,釋放細胞漿蛋白,然后通過離心得到細胞核沉淀。后通過細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高,有效避免核/漿蛋白的交叉污染,可以用于Western、Gel Shift、報告基因檢測以及酶活力測定等后續(xù)操作。

 

注意事項

1. 如需提取磷酸化蛋白請在抽提試劑中加入磷酸酶抑制劑。

2. 所有樣品操作請置于冰上進行。

3. 可根據(jù)具體實驗情況調(diào)整試劑用量,保證各試劑使用比例為                               Nc-試劑   A:Nc-試劑     B:Nc-試劑     C=100:5.5:50。

4. 可以采用更高的速度來離心。

5. 戴手套操作。                                                                                                                                                           

操作步驟        

l    細胞中胞漿、胞核蛋白的提取

 1.  收集細胞,計數(shù)。

 2.  請在蛋白抽提前取出抽提試劑Nc-試劑A和Nc-試劑C進行預冷,按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物(例如990μ抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意:在進行蛋白抽提前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3.  1×107細胞中加入1 ml Nc-試劑A(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                   渦旋5秒以充分混勻,冰上孵育20分鐘。

    注意:各種細胞的特性不同,需要根據(jù)不同細胞的特性調(diào)整Nc-試劑A的用量,如果蛋白濃度小,按比例減少Nc-試劑A及后續(xù)Nc-試劑B、Nc-試劑C的用量。

 4.  加入55    μl Nc-試劑    B,渦旋5秒以充分混勻,冰上孵育1分鐘。

 5.  4℃  12,000 rpm(13,400×g)離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞漿蛋白)。

 6.  向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                      渦旋5秒以充分混勻,重懸沉淀,冰上孵育40分鐘,每隔10分鐘渦旋混勻一次,每次約15-30秒。

 7.  4℃  12,000 rpm離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞核蛋白)。 組織中胞漿、胞核蛋白的提取

 1. 取材,保存組織。

 2. 請在蛋白抽提前取出抽提試劑Nc-試劑A和Nc-試劑C進行預冷,按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物(例如990μl抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意:在進行蛋白抽提前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3. 稱組織重量,每100 mg組織中加入1 ml Nc-試劑A(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),用勻漿器在冰上充分勻漿,

    放置在冰上孵育20分鐘。

    注意:各種組織的特性不同,需要根據(jù)不同組織調(diào)整Nc-試劑A的用量,如果蛋白濃度小,按比例減少Nc-試劑A及后續(xù)Nc-試劑B、Nc-試劑C

的用量。

 4. 加入55μl Nc-試劑B,渦旋5秒以充分混勻,放置在冰上孵育                        1分鐘。

 5.  4℃12,000 rpm(13,400×g)離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞漿蛋白)。

 6. 向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                      渦旋5秒以充分混勻,重懸沉淀,冰上孵育40分鐘,每隔10分鐘渦旋混勻一次,每次約15-30秒。

 7.  4℃12,000 rpm離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(此提取液為胞核蛋白)。

參考附表                            

                                              表1.  常見問題及解決辦法

                                                          

問題                   可能原因            解決方法

                  細胞未裂解                   適量增加試劑的使用量

1細胞漿/核蛋白提取率低

                   細胞沉淀未充分懸浮                充分渦旋

                     未*收集細胞核           延長加入Nc-試劑 B 后的離心時間

2蛋白濃度低         未加入足量抽提試劑               調(diào)整試劑使用量

3蛋白無活性或     樣本未置于4℃環(huán)境中  請于4℃離心,除渦旋外,保證樣品置于冰上

活性過低            蛋白酶不*抑制        添加其它蛋白酶抑制劑

            未*移走細胞漿蛋白裂解液裂解細胞核前,小心移走細胞漿蛋白裂解液

4細胞核及漿蛋白

   未分開        未充分裂解細胞  增加渦旋時間確保收集的細胞充分懸浮

                 組織勻漿過度、不足或不均勻             優(yōu)化勻漿條件

 

 

 

實驗室代做實驗項目

 

試劑盒免費代檢測

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

成人综合伊人五月婷久久| 中文字幕精品无码亚洲字幕 | 欧美亚洲精品suv| a片在线观看免费| 狠狠色综合tv久久久久久| 少妇性l交大片| 亚洲区色情区激情区小说色情书 | 亚洲欧洲日产国码高潮AV| 伊人久久精品无码二区麻豆| 成人性生交大片免费看中文| (无码视频)在线观看| 国产欧美一区二区三区在线看| 日本XXX色视频在线观看 | 国产手机精品一区二区| 又硬又粗进去好爽a片看| 久久久久国产综合av天堂| 麻豆蜜桃69无码专区在线| 国产下药迷倒白嫩美女| 国产精品a免费一区久久电影 | 高清中文字幕在线a片| 久久精品国产亚洲av麻豆色欲| 怡红院a∨人人爰人人爽| 国产精品无码亚洲av一区| 丰满少妇被猛烈进AV毛片| 激情 人妻 偷乱在线视频| 久久久久久精品免费免费自慰| 午夜福利理论片在线播放| 国内露脸少妇精品视频| 国产色在线 | 日韩| 99精品无人区乱码1区2区3区| 免费a级毛片无码免费视频120软件 | 中国熟妇xxxx| 亚洲蜜芽在线观看精品一区| 国产又粗又猛又爽又黄的a片小说 色婷婷六月亚洲综合香蕉 | 99久久国产宗和精品1上映| 国产专区一线二线三线品牌| 国产精品三级一区二区| 久久久久人妻精品区一三寸| 精品淑女少妇AV久久免费 | 欧美视频毛片在线播放| 中文字幕丰满乱子伦无码专区|