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A549-DDP細胞培養(yǎng)說明書
點擊次數(shù):3090 更新時間:2018-08-14

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)

貨號:HRCL-031/DDP

 

細胞介紹

這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。。

 

細胞特性

1) 來源:肺癌

2) 形態(tài)上皮細胞

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,1000RPM,常溫條件,離心5min后潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

 

細胞用途:僅供科研使用。

                       

細胞培養(yǎng)步驟

一. 培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

注意客戶收到細胞后按照下面的要求操作:培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的。待細胞長到 70-80%的匯合度時,去掉培養(yǎng)液,加入含 500ng/ml DDP藥物的培養(yǎng)液,放入培養(yǎng)箱,這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來,但是不要緊,通過換液可以去掉,下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了,這時可以一直用含藥培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細胞,一兩代之后可以將藥物濃度提高到 800ng/ml,含藥培養(yǎng)液用于細胞培養(yǎng)都沒問題的,凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。

1) 準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基(Gibco),90%;胎牛血清,10%,添加PS,1%,1~2ug/ml DDP。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲存。

二. 細胞處理

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,可進行傳代培養(yǎng)

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2。

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

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